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    冷冻切片技术在TEM样品制备中的关键作用
    来源: 时间:2023-12-04 15:48:30 浏览:2290次

    冷冻切片技术在TEM样品制备中的关键作用

     

    冷冻切片技术是一种在超低温条件下对样品进行切片的方法,它能够保持样品的原始形态和结构,从而为TEM提供了高质量的观察材料。

     


     

    一、技术原理

    冷冻切片技术是利用液氮或液氦将样品快速冷却至低温,使水分迅速凝固,从而使组织或细胞结构固定并保持原始形态,在冷冻过程中,样品中的水分会形成冰晶,这些冰晶可以在一定程度上支撑和保护细胞结构,防止其在切片过程中受到破坏。

     

    二、制样流程

    1. 样品采集:采集新鲜的生物组织或细胞样品,尽量减少样品搁置时间,以保持其原始状态。

    2. 固定:将采集好的样品用固定剂进行固定,如戊二醛、多聚甲醛等,以保持细胞结构。

    3. 清洗:将固定好的样品用PBS缓冲液进行清洗,去除多余的固定剂和杂质。

    4. 脱水:将清洗后的样品用不同浓度的酒精或丙酮进行梯度脱水,以去除样品中的自由水。

    5. 渗透:将脱水后的样品用包埋剂(如环氧树脂)进行渗透,使其充满整个样品。

    6. 包埋:将渗透后的样品用树脂进行包埋,使其具有足够的硬度进行切片。

    7. 切片:使用冷冻切片机将包埋好的样品切成薄片,一般厚度为4-20μm

    8. 贴片:将切好的切片粘贴到处理好的载玻片上,使其平整均匀。

    9. 干燥:将贴好的切片进行干燥处理,一般采用室温干燥1小时。

    10. 染色:根据需要,对切片进行染色,如使用金属盐类进行电子染色。

     

    三、在TEM中的应用

    冷冻切片技术在TEM样品制备中具有重要作用,其主要体现在以下几个方面:

    1. 保持原始形态:冷冻切片技术能够保持样品的原始形态和结构,使TEM观察更加准确。

    2. 提高样品质量:冷冻切片技术可以减少样品在制备过程中的损伤,提高TEM样品的质量。

    3. 广泛应用于生物学领域:冷冻切片技术广泛应用于生物学领域,如研究细胞结构、脂肪、神经组织等。

    4. 快速制片:冷冻切片技术具有快速制片的特点,有利于临床诊断和科学研究。

     

    通过冷冻切片技术制备的样品,可以保持原始形态和结构,为TEM提供了高质量的观察材料,随着冷冻切片技术的发展,其在生物学、医学等领域的研究将越来越广泛,然而,冷冻切片技术也存在一些挑战,如对设备和技术要求较高,操作过程中需要严格控制温度和湿度等;因此,进一步优化冷冻切片技术,提高其制备样品的质量和效率,是当前研究的重要方向。

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    12条评论
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    全部 3小时前 四川
    文字是人类用符号记录表达信息以传之久远的方式和工具。现代文字大多是记录语言的工具。人类往往先有口头的语言后产生书面文字,很多小语种,有语言但没有文字。文字的不同体现了国家和民族的书面表达的方式和思维不同。文字使人类进入有历史记录的文明社会。
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