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    细胞毒性/增殖

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    项目介绍

    细胞增殖及毒性检测是生物相容性测试的一种,检测药物或者新型材料在生物环境中的毒性情况,即通过检测材料或者药物对细胞的增殖或者生长的影响,来评价药物或材料的毒性或者活性,主要用于药物活性筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、抗肿瘤药效测定等;常用MTT法或者CCK-8法检测。

    操作流程:

    (1)收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度3x104  ~5x104 个/mL;

    (2)96孔加入细胞悬液,100ul/孔,边缘用pbs填充,5%CO2 、37℃孵育;

    (3)培养24h后给药,设置3~6个复孔,5%CO2 、37℃孵育;

    (4)孵育适当时间后,弃旧液,用无血清培养基与CCK8按照10:1稀释200ul/孔/无血清培养基与MTT按照9:1稀释,200ul/孔,继续培养至所需时间点;

    (5)CCK8: 时间到后,酶标仪450nm/处测量各孔的吸光值。

    客户提供:

    (1)足量样品、样品信息(如细胞类型、分子量、溶解性、稳定性、保存条件等);
    (2)相关实验设计内容(如样品作用时间、浓度等、细胞株等)。

    项目案例

    样品要求

    1.待测样品(浓度用户指定)、实验方案、相关细胞、试剂盒及生物耗材等,平台可有偿提供。

    常见问题

    Q1、MTT法检测细胞活性原理

    在活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能将外源性MTT还原为不溶于水的蓝紫色甲臢化合物,用二甲基亚砜(DMSO)将其溶解成溶液,用酶标仪测定其浓度(OD490或者570),从而定量测定细胞的存活比例,细胞增殖越多越快,对应的吸光度越高;细胞毒性越大,对应的吸光度越低。

    Q2、CCK8法检测细胞活性原理

    CCK-8细胞活性检测试剂中含有WST-8 —— 一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂存在的情况下,可以为线粒体内的脱氢酶验明正身。在脱氢酶作用下,WST-8被还原生成橙黄色的甲瓒产物,用酶联免疫检测仪在OD 450nm波长处测定其光吸收值。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

    Q3、相较于MTT法,CCK8试剂盒的优点有哪些?

    1.使用方便,省去了洗涤细胞,不需要放射性同位素和有机溶剂;

    2.CCK-8法能快速检测;

    3.CCK-8法的检测灵敏度很高,甚至可以测定较低细胞密度;

    4.CCK-8法的重复性优于MTT 法;

    5. CCK8适用于贴壁细胞和悬浮细胞;如样品容易沉淀或残留且易溶于DMSO,建议选用CCK8法检测。

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