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    SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

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    项目介绍

    SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE):SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠–聚丙烯酰胺)凝胶电泳是一种可以根据蛋白质的分子量分离样本中蛋白的技术。蛋白质分子在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,它的迁移率取决于所带净电荷及分子的大小和形状等因素。如果在聚丙烯酰胺凝胶系统中加入SDS和巯基乙醇,则蛋白质分子的迁移率主要取决于它的分子量,而与所带电荷和形状无关。选择一系列不同分子量的球形或基本呈球形的蛋白质作为标准物,使其形成SDS复合物。把这些复合物在相同条件下进行电泳分离,分子量小的物质泳动距离大,分子量大的物质泳动距离小。测定出相对泳动率,用相对泳动率对蛋白质的分子量的对数作图,它们在一定范围内呈直线关系。因此可作为标准曲线来检测样品蛋白质的分子量。目前,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)主要应用在蛋白质分子量测定、特异性蛋白质检测、菌种鉴定等方面

    项目案例

    样品要求

    1.检测组织量要求为100mg(即黄豆大小);

    2.细胞量要求为10^6及以上,细胞收集方式—— 贴壁细胞:倒掉培养基,pbs清洗2-3次,用细胞刮收集细胞,2000g,离心5min,然后去掉上清液,细胞沉淀干冰运输; 悬浮细胞:2000g,离心5min,然后收集细胞沉淀,干冰运输;

    3.血液样本:全血采用EDTA-抗凝管装,至少1ml,4度运输,血清或白细胞采用干冰运输;

    4.剩余样本需要返还的项目,需要提前备注。在收到项目完整版结题报告一个月内告知公司,逾期样本将安排清理。如果样本特别珍贵,需提前说明。一般情况下,样本不予返还;样本返回需要送样方承担返还费用(主要是干冰费和快递费)。

    常见问题

    Q1、1.如何读取SDS-PAGE结果

    电泳后肉眼无法观察到蛋白分离,需要后续的染色技术。考马斯亮蓝染色和银染是常规检测和定量电泳分离蛋白质的常用方法。经过固定-染色-脱色等简单处理后,可以清楚的观察到蛋白质的分布。

    Q2、2.如何储存SDS-PAGE凝胶

    通常在每次实验之前准备新鲜的SDS-PAGE凝胶。然而凝胶也可以在4℃的清水的储存约一周。如果凝胶染色后不能及时拍照,则需要将其放入水中,以防止凝胶干燥和收缩。建议尽快拍摄染色结果,如果凝胶长时间浸泡在水中,条带会散开

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