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蛋白组学

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蛋白组学

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项目介绍


一、基本介绍

蛋白组学(Proteomics)是继基因组学之后兴起的一门前沿学科,以细胞、组织或生物体在特定时空条件下表达的全部蛋白质为研究对象,系统分析蛋白质的种类、丰度、翻译后修饰(PTM)及蛋白-蛋白相互作用网络。

研究领域

疾病标志物筛选、疾病控制机制、药物作用靶点研究、发育机制研究、植物抗逆研究、营养吸收机制研究、稀有物种研究、特殊功能蛋白质筛选

技术平台

高分辨质谱(nanoLC-MS/MS)为核心,结合四级杆-飞行时间(Q-TOF)、Orbitrap、timsTOF等质量分析器。平台支持 Label free(非标记)、DIA(数据非依赖采集)、4D-DIA(增加离子淌度维度)、TMT/iTRAQ(同位素标记)、PRM(靶向平行反应监测)等多种模式。

核心流程

检测流程:蛋白提取 → 酶解成肽段 → nanoLC液相分离 → 质谱检测 → 数据库检索匹配 → 蛋白定性定量 → 生物信息学分析(GO/KEGG/PPI/聚类/差异分析)

检测流程(翻译后修饰):常规蛋白提取酶解 → 修饰肽段亲和富集(如TiO₂富集磷酸化肽段、抗体富集泛素化/乙酰化肽段、凝集素富集糖基化肽段)→ LC-MS/MS检测 → 修饰位点定位与定量。借助4D技术可大幅提升低丰度修饰肽的检出率。

注释:蛋白翻译后修饰(PTM)是指蛋白质在翻译完成后发生的化学修饰(磷酸化、乙酰化、糖基化、泛素化、乳酸化等300+种),是调控蛋白功能的关键机制。


适用物种

人、小鼠、大鼠、斑马鱼、果蝇、线虫、酵母、拟南芥、水稻、玉米、大豆等模式及非模式物种;也适用于微生物、植物、海洋生物等

应用领域

生物标志物发现:血液/尿液/组织差异蛋白筛选,疾病早期诊断标志物、预后评估标志物

肿瘤机制研究:肿瘤异质性、转移机制、耐药蛋白、肿瘤微环境蛋白图谱构建

药物靶点开发:药物作用靶点鉴定、药效蛋白响应、脱靶效应分析

信号转导研究:磷酸化/乙酰化/泛素化等翻译后修饰调控网络解析

神经科学研究:神经退行性疾病蛋白聚集、突触蛋白组、脑区蛋白差异

心血管研究:心肌蛋白谱、动脉粥样硬化蛋白标志物、Olink心血管Panel

免疫与感染:炎症蛋白通路、免疫微环境、感染后宿主蛋白应答

植物与农业:作物抗逆蛋白、发育蛋白组、品质性状蛋白关联

代谢疾病研究:糖尿病/肥胖/脂肪肝蛋白组、胰岛素信号通路

临床大队列:Olink/SomaScan高通量血液蛋白组、千人级别蛋白标志物筛查

采集模式对比

模式原理说明优势适用场景
Label free(非标记定量)DDA模式采集,基于MS1峰面积或谱图计数进行相对定量,无需同位素标记操作简便、成本低、样本间独立中小规模样本、常规发现研究
DIA(数据非依赖采集)将质量范围切分为多个窗口,依次对所有母离子进行二级碎裂,无遗漏采集定量重现性好、覆盖深度高、适合大批量大队列、临床样本、高深度定量
4D-DIA / diaPASEF在DIA基础上增加"离子淌度"维度(CCS值),timsTOF Pro2专属,离子利用效率提升灵敏度提升~12倍、检测深度增加微量样本、复杂样本、修饰蛋白组
PRM(平行反应监测)高分辨质谱靶向采集目标蛋白的预选肽段,全碎片谱记录,无需抗体高特异性、可绝对定量、多蛋白并行差异蛋白验证、生物标志物定量确认



二、项目分类

定量蛋白组(常规/高深度/微量/血液)

从蛋白质整体表达水平出发,对样本中全部蛋白质进行无偏向性定性定量分析。根据深度和样本类型分为快速、深度、微量、血液专项等方案。

Ultra-Fast定量蛋白组常规速度,适宜中小批量样本,检出~8000蛋白(Hela细胞)
Ultra-Deep定量蛋白组高深度鉴定,检出10000+蛋白,适合深度探索
4D-DIA定量蛋白组4D+diaPASEF模式,灵敏度提升~12倍,定量更稳定
4D-label free定量蛋白组4D平台+Label free,兼具深度与灵活性
Ultra-Fast血液蛋白组去除高丰度蛋白干扰,检出3000+血浆蛋白
Ultra-Deep血液蛋白组低丰度蛋白深度富集,检出4000+血浆蛋白
microDIA微量蛋白组微量样本专用(穿刺/卵细胞/微量组织),解决微克级难题
蛋白鉴定仅定性鉴定样本中的蛋白种类,不做定量比较


翻译后修饰蛋白组(PTM)

蛋白质功能不仅取决于表达量,更取决于翻译后修饰。该类服务通过特异性富集+4D技术,实现各类修饰位点的精准鉴定和定量。

磷酸化蛋白组最常见的PTM,信号转导核心。磷酸化位点检出可达17000+
乳酸化蛋白组新兴修饰类型,与代谢-免疫交叉调控密切相关(Warburg效应)
琥珀酰化蛋白组线粒体代谢调控相关修饰,参与TCA循环和能量代谢
4D-label free泛素化蛋白组蛋白降解通路核心修饰,9种泛素连接方式可区分
4D-label free乙酰化蛋白组组蛋白及非组蛋白乙酰化,表观遗传与代谢调控关键


糖基化蛋白组

糖基化是最复杂的PTM之一,与蛋白折叠、细胞识别、免疫应答、肿瘤转移等密切相关。覆盖N-糖、O-糖两大类糖基化类型。

N-糖基化蛋白组天冬酰胺(Asn)连接的糖基化,含糖链完整信息
完整N-糖肽蛋白组保留完整糖肽结构,同时获取糖基化位点+糖链组成信息
O-GlcNAc糖基化蛋白组丝氨酸/苏氨酸连接的O-GlcNAc单糖修饰,与营养感知和信号转导相关


靶向蛋白组(验证与高通量筛查)

在定量蛋白组发现差异蛋白后,进行靶向验证;或直接对已知蛋白Panel进行高通量精准定量。

PRM目标蛋白高分辨质谱靶向采集,无需抗体,可绝对定量,单次检测数十种目标蛋白
Olink蛋白组(target 96)邻位延伸分析技术(PEA),96种蛋白/Panel,14种疾病Panel可选
Olink蛋白组(Explore HT)高通量版,可同时检测数千种蛋白,适合大队列血浆标志物筛选
SomaSeq 11K基于适配体的高通量蛋白检测,可检测~11000种蛋白,fM级灵敏度


特殊蛋白组学

4D-pepLFQ多肽组学以内源性多肽(<10kDa)为研究对象,发现活性多肽、生物标志物
宏蛋白组对微生物群落全部蛋白进行分析,揭示菌群功能活性而非仅物种组成


样品要求

定量蛋白组(常规)

样本类型最低要求建议量保存与运输备注
动物组织≥50mg≥100mg液氮速冻,-80℃保存,干冰运输避免反复冻融
细胞沉淀≥1×10⁶≥5×10⁶PBS洗3次去血清,-80℃保存,干冰运输贴壁细胞需刮取
血浆/血清≥100μL≥200μL-80℃保存,干冰运输勿用肝素抗凝管
植物组织≥200mg≥500mg液氮速冻,-80℃,干冰运输含多糖多酚样本需特殊处理
微生物菌体≥50mg湿重≥100mgPBS洗3次,-80℃,干冰运输需注明培养基成分

翻译后修饰蛋白组

修饰类型细胞组织特别注意
磷酸化蛋白组≥2×10⁷≥200mg需添加磷酸酶抑制剂;样本采集后尽快处理
泛素化蛋白组≥2×10⁷≥200mg可检测9种泛素连接方式;需注明研究目的
乙酰化蛋白组≥2×10⁷≥200mg组蛋白/非组蛋白乙酰化均可检测
乳酸化蛋白组≥2×10⁷≥200mg新兴修饰,样本处理条件要求严格
琥珀酰化蛋白组≥2×10⁷≥200mg线粒体富集样本建议单独准备
糖基化蛋白组≥2×10⁷≥200mg糖链结构不稳定,务必-80℃保存

血液蛋白组(Ultra-Fast / Ultra-Deep)

检测类型血浆/血清量保存要求适用场景
Ultra-Fast血液蛋白组≥100μL-80℃,干冰大量样本快速筛查,3000+蛋白
Ultra-Deep血液蛋白组≥200μL-80℃,干冰深度低丰度蛋白发现,4000+蛋白
Olink蛋白组(Target 96)≥1μL/蛋白对-80℃,干冰14种疾病Panel可选,仅需微量血浆
Olink蛋白组(Explore HT)≥10μL-80℃,干冰高通量数千种蛋白,大队列标志物筛查
SomaSeq 11K≥55μL-80℃,干冰~11000种蛋白,fM级灵敏度

微量样本与特殊类型

检测类型样本要求运输条件
microDIA微量蛋白组最低至μg级蛋白;穿刺样本、卵细胞、微量组织-80℃,干冰
多肽组学(4D-pepLFQ)组织≥200mg(肠/肾/肝/脾/睾丸等)液氮速冻,-80℃,干冰
宏蛋白组粪便≥2g;肠道内容物≥1g;土壤/淤泥≥2g-80℃,干冰
PRM目标蛋白同常规定量蛋白组要求-80℃,干冰


送样通用注意事项

① 所有样本必须-80℃保存,干冰运输,避免反复冻融;
② 血液样本
禁用肝素抗凝管(肝素干扰酶解和质谱检测),推荐EDTA管;
③ 组织样本离体后
尽快液氮速冻(30秒内),减少蛋白降解;
④ 植物样本(特别是含多糖/多酚的样本)需告知技术支持,可能需要特殊前处理方案;
⑤ 修饰蛋白组样本
必须添加对应抑制剂(磷酸酶抑制剂、去乙酰化酶抑制剂等);
⑥ 送样时请附带完整的样本信息表:物种、组织类型、处理条件、生物学重复数、预期蛋白量。


生物学重复建议

研究类型每组最低重复推荐重复
细胞实验≥34-6
动物实验≥35-8
临床样本(发现阶段)≥1020-30
临床样本(验证阶段)≥3050-100
植物田间实验≥35-6


项目案例

定量蛋白组_结果1_PCA得分图

定量蛋白组_结果2_火山图与鉴定数

翻译后修饰_结果1_Motif分析

翻译后修饰_结果2_PTM类型与功能分布

糖基化蛋白组_结果1_位点鉴定统计

糖基化蛋白组_结果2_表达热图

靶向蛋白组_结果1_标准曲线与定量比较

靶向蛋白组_结果2_表达矩阵热图

特殊蛋白组_结果1_多肽组学分析

特殊蛋白组_结果2_宏蛋白组分析

蛋白组学

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1. 超时全额退

正常预约同步辐射XAFS测试固定机时且样品正常邮寄至对应测试线站,如无不可抗力影响(停电/掉光/自然灾害/政策影响等),测试超时5个工作日未发数据,全额退款。

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以预约的固定测试机时时间后第一个工作日为起始日期,需满足完成下单、预约机时、按照预定时间送样条件,不满足前述条件的样品不参与此活动(具体时间预约请联系工作人员确认)。

3. 注意事项

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