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项目介绍

生物透射电镜介绍:透射电镜,即透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,简称 TEM),是一种最高分辨率可达到0.1-0.2纳米的显微镜,是观察和研究超微结构的重要工具。在生物科学研究方面,透射电镜可用来观察细胞整体结构、细胞亚细胞结构,包括(植物)细胞壁、细胞膜、细胞核和各种细胞器的变化、外源物质(如病原微生物、各种纳米颗粒)与细胞的关系,如外源物质进入细胞内部的方式、在细胞内的分布情况、细胞对外界刺激的反应(包括自噬、凋亡、坏死等)。

预约前请务必阅读

前处理方法:

您需要提供的样品:收集细胞/组织取样(新鲜迅速取材),置于1.5ml尖底离心管内,加入预冷的终浓度为2.5%的戊二醛和2%多聚甲醛固定液(固定液加到⅘离心管,使样品完全浸没在固定液中),放置于4℃过夜,请不要倒弃固定液,一般固定12h或过夜后可寄送。

具体取材及固定方法如下:

1.对于细胞类,106以上的细胞,用新鲜的培养液兴奋细胞,用细胞刮刀刮下来或者酶消化,加入预冷的终浓度为2.5%的戊二醛和2%多聚甲醛溶液,固定半小时,1500-3000转离心,5-10min,收集细胞于管底肉眼可见黄豆或者绿豆粒大小,弃上清,沿管壁缓慢加入4℃新的固定液,然后放入4°C冰箱过夜。

2.对于组织类,新鲜取材,取材位置准确,组织大小尽量在1-2mm³(长1-5mm×宽1mm×高1mm),离体取材后请尽快投入4℃预冷的固定液中,然后放入4°C冰箱固定过夜。

3.对于细菌类,吸取OD0.5-0.8的培养物,加入预冷的终浓度为2.5%的戊二醛和2%多聚甲醛溶液,固定半小时,3000-5000转离心,5-10min,离心后弃上清,收集菌体沉淀于管底黄豆大小,可以用预冷的pH7.2的PB洗1-2次,弃上清,沿管壁缓慢加入新的4℃预冷的固定液,然后放入4°C冰箱过夜。

样本编号建议按照字母或数字来,标记清晰,样本量充足。

*固定液的量请参考上图,加至箭头所示位置,细胞、细菌、真菌样品用尖底离心管

*如为其他特殊样品,需要特殊的固定方式和前处理方式,请与工作人员沟通确认。

项目案例

样品要求

1.不需要稀释的液体样品需要准备0.3毫升以上,最好1毫升,用2毫升左右ep管装并封口胶封好口;注明样品成分和类型,预期形貌和尺寸;一般会拍摄10张左右的照片;

2.默认染色制样方式:取10微升液体滴铜网,用1%磷钨酸(或饱和醋酸铀)染色制样并清洗,室温干燥制样后放置一个小时以上;细菌、真菌、病毒、外泌体、细胞、脂类、胶束、蛋白默认吸附5到10分钟,染色1分钟,不超声也不稀释;超声可能会改变样品的形态,样品浓度很难用肉眼判断,若需要超声和稀释,请订单中明确;

3.染色制样结果受样品纯度和浓度的影响较大,若样品中含有较多的有机盐和杂质,染色效果一般较差;

4.病毒、外泌体需要浓缩,50微升以上;

5.该项目不支持回收,请自行留样;

6.一般送样方式为4℃冷藏,冷冻送样需要在订单中特别指明(比如外泌体和病毒样品);上门取样样品,样品如需冷藏,请一定准备冰块或干冰和泡沫箱;

7. 细菌和病毒等需要灭活处理,有传染性的样品不做测试;

8. 注明图片标尺和对应的图片张数,数量不超过10张。如未注明,不接受因标尺问题导致的免费补拍或重拍(标尺100nm是仪器的极限,通常拍出的样品分辨率低,不建议选择该标尺)。我们尽量会找您预期的图片形貌,但是最终以实际形貌为准。

常见问题

Q1、低压的范围是?

80-120kv

Q2、哪些样品一般需要负染?

观察形貌的生物和有机类,如细菌、病毒、胶束等。

Q3、染色剂有哪些?

磷钨酸、醋酸铀。

Q4、低压可以拍高分辨吗?

不能,因为电压低,能量小,分辨率达不到要求。

Q5、送样方式?

易变质的需要低温冷藏,病毒、外泌体需要浓缩并冷冻。

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