预存
Document
当前位置:文库百科文章详情
蛋白质免疫印迹实验样品制备的关键技巧
来源: 时间:2024-08-19 10:13:41 浏览:1062次

蛋白质免疫印迹实验样品制备的关键技巧

 

WB实验,即Western Blot实验,是一种用于检测特定蛋白质表达水平的方法高效WB实验的关键在于样品制备的技巧,包括蛋白质提取、定量、变性、分离、转移、封闭、一抗和二抗孵育等步骤。

以下是WB样品制备的关键技巧:

一、蛋白质提取

1. 选择合适的提取试剂:根据样品的性质,选择合适的蛋白质提取试剂,如Triton X-100SDS等。

2. 样品处理:确保样品充分研磨、匀浆,使蛋白质充分释放。

3. 提取时间:根据样品特性和提取试剂的性质,调整提取时间,通常为30-60分钟。

二、蛋白质定量

1. 选择合适的定量方法:如BCABradford等,根据样品的特性和检测要求选择合适的方法。

2. 稀释样品:将提取的蛋白质样品适当稀释,以避免在后续步骤中出现高浓度蛋白质导致的背景信号。

三、蛋白质变性

1. 选择合适的变性试剂:如SDS、尿素等,根据样品的特性和检测要求选择合适的方法。

2. 变性条件:调整变性试剂浓度、温度和时间,确保蛋白质充分变性。

四、蛋白质分离

1. 选择合适的分离方法:如SDS-PAGE、等电聚焦等,根据样品的特性和检测要求选择合适的方法。

2. 分离条件:调整分离试剂浓度、温度和时间,确保蛋白质分离效果。

五、蛋白质转移

1. 选择合适的转移方法:如半干法、湿法等,根据样品的特性和检测要求选择合适的方法。

2. 转移条件:调整转移试剂浓度、温度和时间,确保蛋白质充分转移。

六、封闭

1. 选择合适的封闭试剂:如BSA、脱脂奶粉等,根据样品的特性和检测要求选择合适的方法。

2. 封闭条件:调整封闭试剂浓度、温度和时间,确保蛋白质充分封闭。

七、一抗和二抗孵育

1. 选择合适的抗体:根据检测目的,选择合适的抗体,如单克隆抗体、多克隆抗体等。

2. 孵育条件:调整抗体浓度、温度和时间,确保抗体与蛋白质充分结合。

3. 洗涤步骤:在孵育过程中,充分洗涤样品,去除未结合的抗体,减少背景信号。

八、数据分析

1. 数据处理:对采集的数据进行整理和分析,如去除异常值、计算平均值等。

2. 结果解释:根据实验数据和蛋白质学原理,对实验结果进行解释。

3. 可视化:利用图表、曲线等形式直观展示实验结果。

 

评论 / 文明上网理性发言
12条评论
全部评论 / 我的评论
最热 /  最新
全部 3小时前 四川
文字是人类用符号记录表达信息以传之久远的方式和工具。现代文字大多是记录语言的工具。人类往往先有口头的语言后产生书面文字,很多小语种,有语言但没有文字。文字的不同体现了国家和民族的书面表达的方式和思维不同。文字使人类进入有历史记录的文明社会。
点赞12
回复
全部
查看更多评论
相关文章

一文详解扫描电子显微镜(SEM)的工作原理及应用技术

2023-10-08

热重分析(TG-DTG)曲线的几种解析方法

2023-12-26

接触角测试(CA)的原理、样品制备要求及实际应用

2023-11-16

一文详细介绍he染色的基本原理、实验步骤及注意事项

2023-11-23

恒电流间歇滴定法GITT的基本原理以及测试教程

2022-08-12

TMA技术的基本概念、应用领域以及实际操作中的要点

2023-12-06

项目推荐/Project
蛋白印迹实验(WB)

蛋白印迹实验(WB)

热门文章/popular

基础理论丨一文了解XPS(概念、定性定量分析、分析方法、谱线结构)

晶体结构可视化软件 VESTA使用教程(下篇)

手把手教你用ChemDraw 画化学结构式:基础篇

【科研干货】电化学表征:循环伏安法详解(上)

电化学实验基础之电化学工作站篇 (二)三电极和两电极体系的搭建 和测试

【科研干货】电化学表征:循环伏安法详解(下)

微信扫码分享文章