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一文详细介绍he染色的基本原理、实验步骤及注意事项
来源: 时间:2023-11-23 16:18:24 浏览:18069次

一文详细介绍he染色的基本原理、实验步骤及注意事项

 

HE染色法,又称苏木素-伊红染色法,是一种广泛应用于组织学、胚胎学和病理学教学与科研中的染色方法。




一、基本原理

HE染色法利用两种染料,即碱性染料苏木素和酸性染料伊红,分别与细胞核和细胞质发生作用,使细胞的微细结构通过颜色改变其折光率,从而在光镜下清晰地呈现出细胞图像。染色过程中既有化学反应,又有物理作用参与。

从化学反应来看,组织细胞内含有酸性物质和碱性物质。细胞的酸性物质与碱性染料的阳离子结合,细胞核的碱性物质与酸性染料的阴离子结合。因此,酸性细胞核被碱性的苏木素染成蓝色,而碱性的胞浆被酸性染料伊红染成红色。从物理现象来看,主要有吸附和吸收之说。HE染色提供良好的核浆对比染色,是细胞化学染色中最常用的一种方法。

 

二、实验步骤

1. 样品制备:对于贴壁生长细胞,胰酶消化,调整细胞浓度约1105/ml,滴加于盖玻片上(置于6孔板中),培养相应时间后,取出细胞爬片,用PBS洗涤3次。

2. 样品固定:95%乙醇固定20minPBS洗涤2次,每次1min

3. 染核:苏木素染液染色2-3min,自来水洗涤。

4. 分色:镜下观察,若细胞核染色过深,用1%盐酸酒精溶液分色数秒,自来水洗涤。

5. 染胞质:浸入伊红染液染色1min,自来水洗涤。

6. 吹干或自然晾干细胞爬片后,中性树胶封片。

若细胞用4%多聚甲醛固定,则染色时间相应延长,苏木素染色12-15min,伊红5min即可。

 

三、注意事项

1. 染色时调节pH值很重要。如果组织块在福尔马林中固定时间长,组织酸化而影响细胞核着色。因此,要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min,使细胞核着色较深。染伊红时胞浆着色不佳,可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。

2. 切片染苏木精后,分色这一步是关键,应在显微镜下控制进行。一般以细胞核染色清楚(晰)而细胞质基本无色为佳。如果过分延长分色时间将导致染色太浅,应重新染色后再行分色。

3. 切片经酒精脱水后,入二甲苯时可出现白色不透明状态,此为脱水不彻底,应将切片退回无水酒精,重新脱水。

4. 脱蜡。切片脱蜡后才能染色,且脱蜡应彻底。脱蜡好坏主要取决于二甲苯的温度和时间。如果二甲苯是用过一段时间,切片又比较厚,室温低应增加脱蜡时间。

5. 在染色过程中,各种试剂的使用顺序、浓度和时间应严格按照实验步骤操作,以免影响染色效果。

6. 实验结束后,要清洁实验台和仪器设备,妥善保存试剂,以免影响下次实验。

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全部 3小时前 四川
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