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免疫电镜测试(IEM)

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免疫电镜技术是组织样品经低温脱水渗透LR White树脂低温聚合包埋,超薄切片70-80nm,用特异性一抗与待检测抗原结合然后用带有胶体金标记的二抗与一抗抗原复合物结合,在电子显微镜下观察,由于二抗上的胶体金形成一定的电子密度而精确指示出相应抗原在亚细胞水平上的定位。

制样要求

  免疫电镜技术成功的关键是:①对细胞超微结构的完好保存;②保证被检细胞或其亚细胞结构的抗原在原位,其抗原性不受损失;③选择的免疫试剂能顺利穿透组织细胞结构与抗原结合。该技术主要用于病毒、细菌等抗原定位、免疫性疾病的发病机理及超微结构免疫细胞化学研究等。

具体操作方法1、1-3min内取样,取样组织1mm3大小。取材前可提前准备装有免疫电镜固定液A液的培养皿,将小组织块离体取下后立即投入培养皿内,用手术刀在培养皿的固定液中进行切割成1mm3的小组织块。再将切割好的小组织块转移至装有新的免疫电镜固定液的EP管内继续固定。 2、取材时尽量精确到需要观察的目的部位(如观察肾小球取肾皮质;观察胰岛取胰岛丰富的胰尾;皮肤,肠胃等在固定液中易打卷的组织可将组织粘在滤纸上进行固定)。 3、取材时一定注意避免镊子挤压等机械损伤,刀片要锋利避免挫伤组织。 4、组织取下后立即投入免疫电镜专用固定液,4℃保存,4℃冰袋运输,在保存和运输过程中固定液切勿冷冻结冰。样品固定后应尽快安排做后续包埋和免疫标记实验,减少抗原丢失的可能性。5、结果观察图像采集:在透射电子显微镜下观察并采集图像,黑色10nm大小的金颗粒即为阳性表达。

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