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    项目介绍

    慢病毒载体是一类重组逆转录病毒载体,由于其结构和功能的特点,慢病毒载体作为一种重要的基因转移工具应用于基因治疗和细胞分子生物学研究领域。区别于一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型细胞,达到良好的基因治疗效果。

    特点:1.大大提高对于一些较难转染的细胞,如原代细胞、 干细胞、不分裂的细胞等转导效率

    2.目的基因整合到宿主细胞基因组的概率大大增加

    3.快速获得高水平的表达

    4.具有最低的细胞毒性,将免疫反应降到最低

    5.能够插入较大的片段(≈ 3kb)

    实验流程:

    制备编码慢病毒颗粒的重组病毒质粒及其三种辅助包装原件载体质粒,分别进行高纯度无内毒素抽提,用本公司的转染试剂 RNAi-Mate 共转染293T细胞,转染后6h更换为完全培养基,培养72h后,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,对其浓缩,得到高滴度的慢病毒浓缩液,用于感染目的细胞。感染后的目的细胞可以通过慢病毒载体上的抗性基因和荧光融合蛋白进行筛选。

    常用慢病毒滴度检测方法比较:




    样品要求

    样品运输和储存

    对于长距离运输,应先将慢病产品保存在-80℃,再采用全程干冰运输,以防滴度下降。

    慢病毒载体在-80℃保存6个月,滴度不会明显下降(保质期6个月)。建议保存6~12个月以上的样品,进行实验前,重新测一次滴度。应尽量避免反复冻融(小于3次)。

    使用前请从-80℃冰箱中取出病毒,冰浴溶解。用不完的病毒可以暂时放在4℃冰箱中,若当天不能用完,请立即存放于-80℃冰箱中。

    常见问题

    Q1、通常在转移载体中最大能够插入多大的目的基因序列?

    基于 HIV 基因骨架的原因,通常插入的目的基因序列要小于4 kb,否则会影响病毒滴度甚至基因表达。

    Q2、慢病毒感染后多久检测细胞基因表达?

    慢病毒感染后一般 72~96h 后检测基因表达,对于生长迟缓代谢慢的细胞,可以适当推迟检测时间,中途换液保持细胞的良好状态。

    Q3、Lentivirus 对目的细胞的感染效率很低,如何提高病毒的感染效率?

    一般,我们通过提高 MOI 值来提高病毒的转染效率,必要时以在培养基中加入 Polybrene(4~8 μg/mL)来提高病毒的感染效率。同时,目的细胞良好的生长状态是获得正常感染效率的保证。

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