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    单细胞凝胶电泳实验(彗星实验​)的应用与试验基本步骤
    来源: 时间:2025-06-17 17:28:02 浏览:1439次

    单细胞凝胶电泳实验(彗星实验)的应用与试验基本步骤

     

    彗星实验Comet Assay),又称单细胞凝胶电泳实验(Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE),是一种在单细胞水平上检测DNA损伤的灵敏技术。该技术由ÖstlingJohanson1984年首次提出,后经Singh等人改进,现已成为遗传毒理学、环境监测、生物医学研究等领域的重要工具。

    彗星实验

    彗星实验的作用

    检测DNA损伤:评估细胞在各种条件下(如化学物质、辐射、环境污染物等)的DNA损伤程度

    研究DNA修复机制:通过时间序列实验观察DNA损伤后的修复过程

    评估遗传毒性:用于药物开发、化妆品安全评估等领域的遗传毒性测试

    环境监测:评估环境污染物对生物体的遗传毒性影响

    临床研究:研究疾病(如癌症)与DNA损伤的关系

     

    彗星实验的基本步骤

    1. 样品制备

    收集待测细胞(可以是培养细胞、血液淋巴细胞、组织细胞等)

    制备单细胞悬液(浓度约1×10 cells/mL

    细胞活力检测(建议>80%

    2. 包埋

    将细胞与低熔点琼脂糖(0.5-1%)混合

    滴加在预先涂有普通琼脂糖的载玻片上

    盖上盖玻片,4℃固化5-10分钟

    3. 裂解

    去除盖玻片,将载玻片浸入裂解液(含2.5M NaCl, 100mM EDTA, 10mM Tris, 1% Triton X-100, pH 10

    4℃裂解1-2小时(或过夜)

    4. 解旋

    将载玻片置于碱性缓冲液(300mM NaOH, 1mM EDTA, pH>13)中

    室温解旋20-40分钟,使DNA双链解旋并暴露损伤位点

    5. 电泳

    在相同碱性缓冲液中进行电泳

    条件通常为:25V300mA20-30分钟(具体参数需优化)

    电泳槽需保持4℃以维持DNA结构

    6. 中和与染色

    用中和缓冲液(0.4M Tris-HCl, pH 7.5)中和2-3次,每次5分钟

    用荧光染料(如EBSYBR Green等)染色

    避光保存待观察

    7. 观察与分析

    荧光显微镜下观察(激发波长与所用染料匹配)

    每样品至少观察50-100个细胞

    使用专业软件(如CASPCometScore等)分析彗星参数:

    尾长(Tail Length

    尾矩(Tail Moment

    DNA百分比(% Tail DNA

    彗星实验的步骤

    彗星实验虽然原理简单,但实际操作中需要精细的技术控制和丰富的经验积累。对于科研人员来说,如果时间有限或缺乏相关实验条件,选择专业的科研服务机构是一个高效可靠的选择。

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    专业技术团队:由经验丰富的实验技术人员操作

    标准化流程:确保实验结果的可靠性和重复性

    多种检测方案:可根据需求提供碱性、中性或酶修饰彗星实验

    全面数据分析:提供专业软件分析的详细报告

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    12条评论
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    全部 3小时前 四川
    文字是人类用符号记录表达信息以传之久远的方式和工具。现代文字大多是记录语言的工具。人类往往先有口头的语言后产生书面文字,很多小语种,有语言但没有文字。文字的不同体现了国家和民族的书面表达的方式和思维不同。文字使人类进入有历史记录的文明社会。
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