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SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳用途分析以及测试中常见问题

来源：测试GO 时间：2022-11-03 10:20:43 浏览：2978次

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳因为操作简单，所以具有广泛的用途。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳是许多研究领域的重要的分析技术。

cas12a蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白质免疫印记结果

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳用途：

1.蛋白质纯度分析；

2.蛋白质分析量的测定，根据迁移率大小测定蛋白质亚基的分子量；

3.蛋白质浓度的测定；

4.蛋白质水解的分析；

5. 免疫沉淀蛋白的鉴定；

6.免疫印迹的第一步；

7.蛋白质修饰的鉴定；

8.分离和浓缩用于产生抗体的抗原；

9.分离放射性标记的蛋白质；

10.显示小分子多肽。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳有效分离范围取决于聚丙烯酰胺的浓度和交联度，其孔径随着双丙烯酰胺与丙烯酰胺比率的增加而减小，比率接近于1：20时，孔径达到最小值。分子量低于10kD的小分子肽类，即使用较高浓度的聚丙烯酰胺凝胶的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳也不能完全分离，或是显不出色，或是显带较弱，带型弥散。且分子量越小，效果也越差。

为了能在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳上显示测定小分子量的多肽，通常采取两种方法：一是增加凝胶的浓度和交联度，在制胶时加入一些可以降低聚丙烯酰胺凝胶网限孔径的溶质分子，使用尿素、甘油或蔗糖等物质；二是选择缓冲液中的拖尾离子的种类和浓度以达到改善多肽的分离效果

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测试的常见问题：

Q1、如何读取SDS-PAGE结果

电泳后肉眼无法观察到蛋白分离，需要后续的染色技术。考马斯亮蓝染色和银染是常规检测和定量电泳分离蛋白质的常用方法。经过固定-染色-脱色等简单处理后，可以清楚的观察到蛋白质的分布。

Q2、如何储存SDS-PAGE凝胶

通常在每次实验之前准备新鲜的SDS-PAGE凝胶。然而凝胶也可以在4℃的清水的储存约一周。如果凝胶染色后不能及时拍照，则需要将其放入水中，以防止凝胶干燥和收缩。建议尽快拍摄染色结果，如果凝胶长时间浸泡在水中，条带会散开。

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