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荧光定量PCR的优点和检测方法盘点

来源：测试GO 时间：2022-11-03 11:37:47 浏览：1274次

荧光定量PCR检测有以下优点：

1.高灵敏性：可检测单个细胞基因；

2.高特异性和精确性：将DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精准性融合，应用荧光探针和光电传导，直接探测基因扩增过程中荧光信号的变化，以获得定量结果，相当于在PCR反应过程中自动完成了Northern杂交；

3.操作简便、速度快：通过计算机和分析软件实现PCR扩增、产物检测和定量分析一体化；

4.安全、无污染：FQ-PCR在全封闭状态下进行PCR扩增和产物分析，杜绝了传统PCR开放检测对环境的污染和由此导致的假阳性；

5.结果观测重复性好：一起在线实时观测，结果判断直观，避免人为因素干扰。

内参基因ACTIN(溶解曲线)

荧光定量PCR检测的两种方法：

1.SYBR GreenⅠ法：

在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

2.TaqMan探针法：

探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。

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