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    蛋白质免疫印迹实验(WB)的常见问题分析
    来源:测试GO 时间:2022-09-07 14:16:01 浏览:2154次

    1蛋白质免疫印迹实验蛋白样本为什么要进行还原和变性?

    答:为了使样本被还原和变性,样品缓冲液中会含有十二烷基硫酸钠(SDS)β-巯基乙醇或二硫苏糖醇(DTT)SDS是一种变性剂,用来打破蛋白的高级结构,变成初级的氨基酸结构,同时以恒定的质量比包被蛋白质,使其带上负电荷。这一恒定的负电荷比是下一步凝胶电泳分离的关键。β-巯基乙醇和DTT都是还原剂,用来断开蛋白自身的二硫键,进一步使蛋白质变成线性结构,此图中简单地展示了这一过程。顺便提一下,有些抗体只能够识别目标蛋白的天然结构,在这种情况下,样本不需要被还原和变性。所以还原和变性的步骤可以省略。但是,大多数蛋白质印迹分析都需要在还原和变性的体系中进行。

     蛋白质免疫印迹实验图片

    2、为什么检测重组蛋白时难以获得条带?

    答:抗体检测重组蛋白质时,存在难以克服的困难,有必要加以考虑。所以推荐确保样品中表达的重组蛋白包含所用抗体的免疫原序列。同时,如果重组蛋白带有标签,标签可能阻止抗体接近表位。尽可能让标签位于重组蛋白的CN末端,以降低这种情况发生的可能性(而不是位于蛋白质的阅读框中间)。

    3、牛奶和 BSA 封闭有区别?

    :抗体可能对封闭剂敏感,一般来讲,BSA会产生更清晰的结果,因为BSA含有较少的蛋白,因而抗体较少与其发生交叉反应。但并非总是如此,有些抗体在牛奶中的效果更好,因为牛奶含有更多种类的封闭蛋白,能封闭更多不同类型的蛋白质。


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    12条评论
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    全部 3小时前 四川
    文字是人类用符号记录表达信息以传之久远的方式和工具。现代文字大多是记录语言的工具。人类往往先有口头的语言后产生书面文字,很多小语种,有语言但没有文字。文字的不同体现了国家和民族的书面表达的方式和思维不同。文字使人类进入有历史记录的文明社会。
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