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圆二色光谱仪(CD)

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圆二色光谱仪(CD)

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项目介绍

圆二色谱 (Circular Dichroism,简称CD)通过入射圆偏振光的波长变化,测定手性样品的左圆偏振光和右圆偏振光摩尔消光系数之差Δε,利用溶液中的光学活性分子(如蛋白质、DNA)的圆二色性探究蛋白质二级、三级结构的重要手段之一。

圆二光谱以可见光及近紫外光作为入射光源,要求被研究的手性分子要具有发色基团,通过对发色基团的研究来获得分子结构信息,因此只能提供分子局部的结构信息。

圆二色光谱技被广泛应用于有机化学,生物化学,配位化学和药物化学等领域,其主要应用如下:

a)手性结构测定:如官能团的位置及特定原子在手性分子中的位置的测定;

b)构型的测定:利用对应关系和邻近关系测定密切相关的一类化合物的相对构型;利用八区律等一类经验和半经验的规律,结合其它方法测定绝对构型;

c)手性介质(包括溶剂和手性大分子)诱导的光学活性的研究,即一个非手性分子被外部介质所诱导而产生光学活性;

d)溶剂效应:研究溶剂与溶质间的相互作用及该作用对分子的光学活性的影响;

e)圆二色光谱仪还可以用作光谱分析。

样品要求

1. 液体样品要澄清透明,且样品及溶剂至少各5ml;

2. 样品及溶剂的浓度对测试影响较大,不宜过高或过低;实验室建议0.1-0.5mg/ml;具体值参考资料(之前测试浓度或文献浓度或紫外测试浓度50%);

3. 粉末样品一般需要10mg左右;

4. 溶剂无法溶解或不能破坏的粉末样品可以考虑做固体圆二色,但是晶体样品研磨后可能会改变样品的圆二色性,不研磨的话对光散射效果强,信号弱;

5.来样需注明样品保存条件(干燥、冷冻、冷藏、避光或其他);


项目案例

常见问题
1、CD光谱的测量条件?

在给定波长范围内有较强的CD信号和合适吸收值的手性物质。

2、下单时,空白样品是否算一个样品?

不算,空白溶剂仅对照用,不另外收费。

3、溶剂或空白对测试的影响有哪些?

液体CD:每种溶剂都有截止波长(可以网上查询),测试范围的最小波长不能低于溶剂的截止波长。(例如乙醇的截止波长205nm,则测试范围最小能到205nm)。缓冲液的浓度过高(一般不高于5mM),很可能在190-200nm会有吸收,从而影响结果。

固体CD:用于压片的溴化钾在195nm以下会有吸收,氯化钾在190nm以下会有吸收,对应的测试范围也只能到195nm或者190nm。

4、原始数据进行预处理的步骤介绍?

(1)基线校正:由于实验过程中可能会受到环境噪音的影响,基线校正是去除这些影响的重要步骤。可以使用多种方法进行基线校正,比如线性拟合或多项式拟合等。

(2)归一化处理:为了便于比较不同样品或不同条件下的数据,常常需要对数据进行归一化处理。归一化可以使得数据在同一量纲下进行比较,通常使用最大的吸光度值进行归一化。

(3)平滑处理:原始数据中可能存在一些随机噪声,可以采用移动平均、Savitzky-Golay滤波等方法对数据进行平滑处理,以提高信号的可识别性。

5、圆二色谱结果怎么分析?

圆二色谱的结果需要考虑峰值位置、峰值强度、峰形、色谱图形和对比分析等因素进行分析:

(1)圆二色谱图谱中的峰值位置可以告诉我们样品的二级结构信息。一般来说,α-螺旋结构在 190-200 nm处会出现负峰,而β-折叠结构在210-220 nm处会出现正峰。通过观察峰值位置的变化,可以推断样品的二级结构变化;

(2)峰值强度反映了样品对旋光的吸收程度,强度越高表示吸收越强。通过比较不同样品的峰值强度,可以判断它们的结构差异;

(3)圆二色谱图谱的整体形状也提供了有关样品结构的信息。例如,如果图谱呈现出对称的双峰形状,那么可能存在一种手性结构。而如果图谱呈现出单峰形状,那么样品可能是非手性的;

(4)通过比较不同条件下的圆二色谱图谱,可以观察到样品结构的变化。例如,当样品在不同温度下进行测量时,可以观察到峰值位置的变化,从而推断样品的热稳定性等。

6、圆二色谱数据分析需要哪些软件支持?

在进行圆二色谱数据分析时,选择合适的软件工具能够大大提高分析效率和准确性。以下是一些常用的软件及其特点:

OriginLab:Origin是一款强大的数据分析和绘图软件,支持多种数据处理和统计分析功能,非常适合用于圆二色谱数据的可视化和定量分析。

Matlab:Matlab以其强大的数学计算和数据可视化能力而著称,适用于复杂的数据处理和分析任务,许多研究人员利用Matlab开发自定义算法来分析圆二色谱数据。

GraphPad Prism:Prism是一款用户友好的统计分析软件,尤其在生物医学领域得到广泛应用,适合进行光谱数据的统计分析和可视化。

CDPro:CDPro专门用于圆二色谱数据的分析,能够进行二级结构的定量分析及构象变化的监测,是研究人员常用的专业工具。

SpectraGryph:这款软件支持多种光谱数据格式,提供多种数据处理与分析功能,适合用于圆二色谱数据的分析。

7、圆二色谱数据分析的应用领域有哪些?

圆二色谱数据的分析在多个领域中具有重要应用,以下是一些主要的应用领域:

生物技术与制药:在药物研发过程中,通过圆二色谱分析可以监测蛋白质的折叠状态、稳定性及其与药物分子的相互作用,提供关键的结构信息。

食品科学:圆二色谱技术可以用于分析食品中蛋白质的构象变化,帮助评估食品的营养价值及其加工过程对蛋白质结构的影响。

环境科学:通过分析环境样品中的生物大分子,研究其在不同环境条件下的稳定性和反应性,为环境保护和治理提供科学依据。

材料科学:在新材料的研发中,圆二色谱技术可以用于分析聚合物和纳米材料的分子结构及其性能,为材料设计提供参考。

临床医学:圆二色谱在疾病诊断中具有潜在应用,通过分析生物样品中蛋白质的构象变化,辅助疾病的早期诊断和预后评估。

通过不断深化圆二色谱数据分析的研究,相关领域的科学家们可以更好地理解分子行为及其在不同条件下的变化,从而推动科学研究的进展与创新。

8、影响圆二色谱实验结果的因素有哪些?

影响圆二色谱实验结果的因素很多,主要包括温度、浓度、溶剂极性等。这些因素可能会影响分子的构象和手性,从而影响实验结果。因此,在实验过程中需要控制这些因素,以确保实验结果的准确性。

9、圆二色谱 CD和圆偏振发光 CPL的联系与区别?

二者都依赖“手性→圆偏振光差异”这一核心:CD 是吸收差,CPL 是发射差,CD 回答“手性分子会不会选择性吸收圆偏振光”,CPL 回答“手性分子发光时会不会选择性发出圆偏振光”;前者是基态指纹,后者是激发态指纹。两者共用样品、共享手性信息,却需要完全不同的光路和浓度窗口,先CD筛结构,再CPL看发光手性,已成为手性发光材料研究的标准流程。

圆二色光谱仪(CD)

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