预存
    Document
    当前位置:文库百科文章详情
    细胞克隆形成实验的目的及实验过程的注意事项
    来源: 时间:2022-08-22 15:04:27 浏览:4001次

    细胞克隆形成实验是测定单个细胞增殖能力的有效方法,常用于抗肿瘤药物敏感性测定、基因治疗、肿瘤放射生物学等方面的研究。细胞克隆形成实验的常用方法有平板克隆形成和软琼脂克隆形成两种。

    细胞克隆形成实验


    平板克隆形成实验与软琼脂克隆形成实验的区别在于前者操作简便,可直接将细胞接种于培养器皿培养,细胞间泌的促生长因子可在培养液中扩散,有助于克隆形成率的提高,适用于贴壁生长细胞。而软琼脂克隆形成实验培养基需添加软琼脂,以模拟体内生长环境,适用于悬浮细胞。


    细胞克隆形成实验的注意事项:

    1. 实验成功的关键之一是细胞悬液的制备与接种密度,细胞一定要分散均匀,不能有细胞团,接种密度不能过大。

    2. 接种完毕后,需将培养基置于37 5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2~3周,期间需每隔3 d换一次液,换液过程需缓慢加入培养基,避免将细胞吹起。

    3. 当肉眼可观察到培养皿中出现克隆后终止培养,弃上清,用PBS小心冲洗2~3次,而后固定15 min、结晶紫染色20 min,洗去染色液后观察计数,克隆形成率=(克隆数/接种细胞数)×100%

    4. 在软琼脂克隆形成实验中,需配置下层软琼脂和上层软琼脂,前者是为防止细胞贴附生长,后者是作为营养补充剂以及为防止下层琼脂胶干燥。

    5. 软琼脂与细胞液混合时温度不宜超过40℃,否则将会烫伤/死细胞。

    6. 琼脂经灭菌后应分装备用,反复加热易导致琼脂降解而产生毒性,且其硬度也会有所下降。

    7. 不同细胞的生长能力有所差异,若细胞克隆率过低,可在培养基中添加胰岛素等促克隆形成物质。


    测试狗


    评论 / 文明上网理性发言
    12条评论
    全部评论 / 我的评论
    最热 /  最新
    全部 3小时前 四川
    文字是人类用符号记录表达信息以传之久远的方式和工具。现代文字大多是记录语言的工具。人类往往先有口头的语言后产生书面文字,很多小语种,有语言但没有文字。文字的不同体现了国家和民族的书面表达的方式和思维不同。文字使人类进入有历史记录的文明社会。
    点赞12
    回复
    全部
    查看更多评论
    相关文章

    一文详解扫描电子显微镜(SEM)的工作原理及应用技术

    2023-10-08

    接触角测试(CA)的原理、样品制备要求及实际应用

    2023-11-16

    热重分析(TG-DTG)曲线的几种解析方法

    2023-12-26

    恒电流间歇滴定法GITT的基本原理以及测试教程

    2022-08-12

    一文详细介绍he染色的基本原理、实验步骤及注意事项

    2023-11-23

    TMA技术的基本概念、应用领域以及实际操作中的要点

    2023-12-06

    热门文章/popular

    基础理论丨一文了解XPS(概念、定性定量分析、分析方法、谱线结构)

    手把手教你用ChemDraw 画化学结构式:基础篇

    晶体结构可视化软件 VESTA使用教程(下篇)

    【科研干货】电化学表征:循环伏安法详解(上)

    电化学实验基础之电化学工作站篇 (二)三电极和两电极体系的搭建 和测试

    【科研干货】电化学表征:循环伏安法详解(下)

    微信扫码分享文章