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    不同生物样品在进行TEM测试前应该如何取材送样?
    来源:测试GO 时间:2022-11-08 09:58:12 浏览:1491次

    生物样本透射电镜(TEM适用于生物样品(细胞,生物组织)材料内部形貌的分析和研究。在进行实验之前,取材和送样是至关重要的,如果处理不当则会直接影响实验结果。本文向大家介绍,在我们进行生物样本透射电镜测试前动物普通组织以及培养细胞的取材、送样。

     生物样本透射电镜测试案例图


    动物普通组织取材、送样

    取材原则:切薄并尽快投入固定液;注意下述要求。

    1. 请尽快固定。动物组织最好在离体后1 min内开始固定。

    2. 非灌注的组织,厚度不超过4 mm,请用恰当方式(比如切宽薄片)体现位置和层次关系。尽量不要事先切成很小的颗粒。

    3. 请用锋利薄刀片切组织,朝一个方向划,不要来回切割,不要挤压、拉扯。

    4. 含有食物残渣(如消化道)、大量血液(如心肌)或其它黏附物(如乳腺等)的组织,请用生理盐水快速漂洗,再投入固定液。

    5. 请保证固定液量充足。固定液和组织的体积比不小于20 : 1

    6. 最初的30 min以后,最好在4 ℃的固定液中浸泡,严禁结冰(太靠近冰箱后壁或冰袋运输都可能使组织结冰。冬季宁可常温送样)。

    备注:

    1)组织尺寸和容器关系(只装一个的参考标准):

    芝麻到绿豆大小(如小鼠肾上腺):请用1.5 ml EP管;

    黄豆大小(小鼠肾脏):请用5 ml离心管;

    铺展面积类似蚕豆大小的组织片:请用平底的25 ml广口瓶;

    (2)每个容器含有N个组织时:容器体积要适当增大,组织不要相互挤压变形。

     

    培养细胞常规简易取材、送样

    1. 最好刮取细胞,收集在离心管中,1500 rpm离心5 ~ 10 min(该参数可按自己的经验调整,目的是不损伤细胞结构的情况下去掉培养液成分)。

    2. 弃上清,加入固定液重悬细胞。

    3. 细胞悬液尽快(1分钟内,久了离心难以紧固)转移至1.5 ml尖底EP管,立即以10000 r/min离心12 min(该参数适用于一般小型台式离心机,不可随意更改,务必使细胞离紧不散);离紧后的细胞约半颗绿豆大小,切不可太大。

    4. 静置15 min,然后小心弃上清,再沿管壁缓慢加入室温或4 ℃固定液(不可冲击、吹散细胞)。

    5. 4 ℃保存或运输。严禁结冰(太靠近冰箱后壁或冰袋运输都可能使组织结冰。冬季宁可常温送样)。

    备注:

    1)对细胞表面结构没有特殊观察要求的动物细胞,均可按本法操作,比如精子、血液、脱落细胞等。薄壁细菌也可按本法处理。

    2)观察细胞连接的实验,严禁用消化的方法收集细胞。

    3)不耐受高速离心的样品,请以悬液送样。尽可能装满,以减少运输途中的震荡。

    4)厚壁真菌等离心紧固后不易渗透的样品,也请以悬液送样,要求同上。

     

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    12条评论
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    全部 3小时前 四川
    文字是人类用符号记录表达信息以传之久远的方式和工具。现代文字大多是记录语言的工具。人类往往先有口头的语言后产生书面文字,很多小语种,有语言但没有文字。文字的不同体现了国家和民族的书面表达的方式和思维不同。文字使人类进入有历史记录的文明社会。
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