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HE染色实验原理与步骤讲解
来源: 时间:2022-12-30 09:32:04 浏览:5426次

一、原理

苏木精-伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ),简称HE染色。HE染色是组织学、病理学教学与科研中最基础、使用最广泛的技术方法之一。

苏木精染液为碱性,可以将组织的嗜碱性结构(如核糖体、细胞核及细胞质中的核糖核酸等)染成蓝紫色;伊红为酸性染料,可以将组织的嗜酸性结构(如细胞内及细胞间的蛋白质,包括路易体、酒精小体以及细胞质的大部分)染成粉红色,使整个细胞组织的形态清晰可见。组织切片方法是教学、科研、病理检验工作中非常常用的一种试验方法,HE染色则是在制作切片的过程中最常用的染色方法。

二、实验标本

石蜡切片、冰冻切片

三、实验试剂材料

多聚甲醛、酒精、二甲苯、石蜡、苏木精水溶液、酒精伊红染色液、生理盐水、蒸馏水、PBS等实验必备溶剂

四、实验步骤

(1)样本组织固定与切片:首先将组织样本进行常规的石蜡包埋。在模具中加入液态石蜡,将待包埋的组织样本放入石蜡中,确保组织位置规整。补充少许液态的石蜡后,进行降温冷冻,使石蜡变为固态达到组织固定的效果,然后使用石蜡切片机进行切片,厚度在4-8um左右。将切完后的组织切片放入载玻片上使用40℃温水浸泡使组织充分伸展。

(2)组织样本脱蜡:将待测组织样本切片放于二甲苯中,充分浸泡10min,浸泡完后更换二甲苯继续浸泡10min,目的是使用二甲苯将切片中的石蜡溶解,这样可以在进行染液染色的时候,染液可以充分进入组织种,同时,二甲苯还可以起到透明的作用,使切片更容易观察。

(3)组织样本水化:将浸泡过二甲苯的待测组织样本先放入无水乙醇中浸泡5min,使脱蜡时用的二甲苯可以被洗脱出去,使水可以进入组织中;再依次置于95%、85%、70%乙醇中各浸泡5min以达到充分水化的效果。

(4)组织切片苏木素染色、分化与反蓝:将水化后的组织样本的切片使用PBS溶液浸泡清洗,每次浸泡5min,总共清洗3次。之后用移液枪吸取已经预先配制好的苏木素染色液,每个组织切片滴加100ul,充分染色10min。染色完毕后使用蒸馏水洗去多余的苏木素染色液。然后再使用1%的盐酸乙醇进行分化,使细胞核中结合过多的染液和细胞浆中的多余的染液被除去。分化完成后,再用双蒸水将组织切片冲洗干净。为了使苏木素染蓝色,使用弱碱性的促蓝液加入组织切片中,让细胞核染蓝色。反蓝结束后先用清水进行清洗,再用双蒸水将组织切片冲洗干净。

(5)组织切片伊红染色与脱水:向上一步驟的组织样本切片中加入伊红染液,并使组织可以充分染色3min,染色完毕后,再将组织切片进行梯度脱水,分别使用浓度为80%、95%以及无水乙醇进行操作。80%的乙醇脱水5s,95%乙醇脱水2min,无水乙醇脱水2min。

(6)组织样本切片风干封片:将脱水后的组织样本切片使用二甲苯浸泡2次,每次持续4min,然后将组织样本切片干,并使用中性树胶封片。

(7)最后在显微镜下观察并拍照

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全部 3小时前 四川
文字是人类用符号记录表达信息以传之久远的方式和工具。现代文字大多是记录语言的工具。人类往往先有口头的语言后产生书面文字,很多小语种,有语言但没有文字。文字的不同体现了国家和民族的书面表达的方式和思维不同。文字使人类进入有历史记录的文明社会。
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