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透射电镜测试之负染色制样技术详解
来源: 时间:2024-09-26 09:48:50 浏览:5448次

透射电镜测试之负染色制样技术详解

 

透射电子显微镜(Transmission Electron Microscopy, TEM是一种高分辨率的显微镜,能够观察到样品的纳米级结构负染色制样技术是一种在TEM观察中常用的样品制备方法,特别适用于病毒、蛋白质、纳米颗粒等微小生物样品的观察。

一、原理

负染色技术是一种利用重金属盐溶液对样品进行染色,使背景电子密度增加,而样品本身保持低电子密度,从而在TEM图像中形成负反差效果的方法;这种技术能够提高样品与背景之间的对比度,使样品的结构细节更加清晰。

二、操作步骤

1. 样品准备:首先,需要将待观察的样品进行适当的稀释,以便于在TEM网格上形成单层或低密度分布的样品。

2. 网格准备:选择合适的TEM网格,通常为碳支持膜网格将网格放在TEM专用滤纸上,用移液枪吸取少量样品滴在网格上。

3. 滴加染色剂:在网格上滴加适量的重金属盐溶液作为染色剂常用的染色剂有磷钨酸(PTA)、醋酸铀等。

4. 吸附和干燥:让染色剂在网格上吸附一段时间,然后用滤纸吸去多余的染色剂,使样品干燥。

5.TEM观察:将制备好的负染色样品放入透射电子显微镜中,调整适当的加速电压和放大倍数,进行观察。

三、注意事项

1. 样品浓度:样品的浓度需要适中,过高的浓度会导致样品堆积,过低的浓度则可能观察不到样品。

2. 染色剂选择:不同的染色剂适用于不同类型的样品,应根据样品的特性选择合适的染色剂。

3. 染色时间:染色时间不宜过长,以免染色剂过度渗透样品,导致样品结构变形或破坏。

4. 干燥过程:干燥过程应避免样品的污染和破坏,操作要轻柔,避免振动。

四、应用

1. 病毒观察:负染色技术是观察病毒颗粒的常用方法,可以清晰地显示病毒的形态和结构。

2. 蛋白质分析:负染色技术可以用于观察蛋白质晶体和蛋白质复合物的结构。

3. 纳米颗粒:对于纳米材料的研究,负染色技术能够提供颗粒的形态和分布信息。

4. 细胞组分:负染色技术可以用于观察细胞器的结构,如线粒体、内质网等。

五、结论

负染色制样技术是一种简单、有效的TEM样品制备方法,它通过增加背景电子密度,使样品在TEM图像中呈现出负反差效果,从而提高了样品的可见性和对比度,这种技术对于观察微小生物样品和纳米材料具有重要作用;然而,负染色技术也有其局限性,如染色剂可能对某些样品造成破坏,染色效果受多种因素影响,因此,在实际操作中,需要根据样品的特点和实验目的,优化实验条件,以获得最佳的观察效果;随着透射电镜技术的发展,负染色制样技术也将不断完善,为科学研究提供更强大的支持。

 

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全部 3小时前 四川
文字是人类用符号记录表达信息以传之久远的方式和工具。现代文字大多是记录语言的工具。人类往往先有口头的语言后产生书面文字,很多小语种,有语言但没有文字。文字的不同体现了国家和民族的书面表达的方式和思维不同。文字使人类进入有历史记录的文明社会。
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