网站地图关于合作招聘帮助

热线：400-152-6858

测试狗科研服务

预存定制

登录

|

注册

Document

当前位置：文库百科 › 文章详情

实验笔记丨免疫组织化学染色（IHC）步骤详解

来源：时间：2022-11-02 15:34:07 浏览：1605次

免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质）。

包埋组织

在４％多聚甲醛溶液中固定组织48小时后，放入一次性组织包埋盒中脱水，浸蜡后包埋。

修片

修剪石蜡切片，直至将石蜡切片修到大部分组织在切面上。

组化

3.1 蜡块制备

将组织蜡块提前泡到冰水混合物中使其变软，将组织蜡块放在切片机上切出５微米的切片，60°Ｃ烘片１小时。

3.2 脱蜡

１）将切片放到60°Ｃ烘箱中烘片４ｈ以上。

２）在二甲苯I里置入片子，持续0.5 h，再置于二甲苯II，依然持续0.5 h。

3.3 水化

１）通过酒精，浸泡切片，酒精浓度不一，分为７０％、８０％、９０％、９５％、１００％，各浓度浸泡时间也有所差异，前３个浓度都是各自浸泡２分钟，后面两个浓度分别浸泡5分钟、10分钟。

２）最后将片子放到双蒸水中浸泡２min。

3.4 组化

１）封闭处理：选择内源性过氧化物酶阻断剂，处理时间为20 min。

２）用双蒸水浸泡三次，单次时间5 min。

３）抗原修复：准备pH＝6.0的10 nM柠檬酸抗原修复液400-600 ml，把片子放到里面，用保鲜膜封住烧杯口防止沸腾溢出。之后放到微波炉中用高火加热10 min。

４）加热后用双蒸水补齐液面，在微波炉中加热40 min（中低火至解冻之间），每隔10 min用双蒸水补齐液面。

５）修复结束后，放到室温下，使其自然冷却。

６）DDW清洗180＂之后，通过PBS清洗，３分钟／次，进行三次。

７）通过一抗封闭，保持４°Ｃ，第二天进行温度回升，为37°Ｃ，然后通过PBS清洗，持续５分钟。

８）在其中添加反应增强液，然后孵育，室温条件，持续20 min，再通过PBS清洗，３分钟／次，进行三次。

９）加入增强酶标山羊抗小鼠／兔IgG聚合物，然后孵育，室温条件，持续20 min，再通过PBS清洗，3分钟／次，进行三次。

1０）滴加DAB显色液（现用现配、比例1:19），室温孵育2-10 min（根据不同的抗体自行选择染色时间）。用自来水轻轻冲洗掉。

１１）复染：加苏木精染色50 s。用DDW，3 min，PBS，５min X３次。

１２）脱水：将片子依次浸泡到不同浓度的酒精梯度中：７０％，ｌｍｉｎ—８０％，ｌｍｉｎ—９０％，1 ｍｉｎ—９５％Ｉ，５ｍｉｎ—９５％ II ，５ｍｉｎ—１００％Ｉ，５ｍｉｎ—１００％ II，５ｍｉｎ。

１３）透明：利用二甲苯Ｉ、二甲苯 II 进行处理，每次处理持续20 min。

１４）中性树脂封片，中性树脂，加盖玻片(组织部位切勿残留小气泡)，自然晾干。

来源：科研日精进

上一篇：机器学习+DFT计算引领催化剂设计新趋势

下一篇：电子结构分析【02】——关于能带的那些事儿（下）

相关文章

晶体结构可视化软件 VESTA使用教程（下篇）

2021-01-22

【科研干货】电化学表征：循环伏安法详解（上）

2019-10-25

手把手教你用ChemDraw 画化学结构式：基础篇

2021-06-19

【科研干货】电化学表征：循环伏安法详解（下）

2019-10-25

晶体结构可视化软件 VESTA使用教程（上篇）

2021-01-22

TEM照片处理软件 Digital Micrograph的进阶操作

2020-11-02

热门文章/popular

晶体结构可视化软件 VESTA使用教程（下篇）

电化学实验基础之电化学工作站篇（二）三电极和两电极体系的搭建和测试

【科研干货】电化学表征：循环伏安法详解（上）

手把手教你用ChemDraw 画化学结构式：基础篇

【科研干货】电化学表征：循环伏安法详解（下）

晶体结构可视化软件 VESTA使用教程（上篇）

微信扫码分享文章

意见反馈

有奖举报

商务合作

公众号

关注我们了解更多

小程序

随时预约掌握进度

举报有奖

TEL: 191-3608-6524

如：在网络上恶意使用“测试狗”等相关关键词误导用户点击、恶意盗用测试狗商标、冒称官方工作人员等情形，请您向我们举报，经查实后，我们将给予您奖励。

举报内容：

200

上传附件：

文件格式不正确，请重新上传文件格式不正确，请重新上传文件格式不正确，请重新上传

文件格式：jpg、jpeg、png、gif、tif、doc、docx、ppt、pptx、xls、xlsx、pdf、zip、rar

联系方式

姓名

电话

提交意见

意见反馈

Suggestions

您可以在此留下您宝贵的意见，您的意见或问题反馈将会成为我们不断改进的动力。

意见类型

测试服务

网站功能

财务报账

其他类型

意见内容

200

联系方式

姓名

电话

提交意见

收起

Document