快捷下单入口 关于 合作 招聘 新人手册 会员中心

    热线:400-152-6858

    测试狗科研服务

    预存 免费试测 登录
    Document
    当前位置:文库百科文章详情
    实验笔记丨免疫组织化学染色(IHC)步骤详解
    来源: 时间:2022-11-02 15:34:07 浏览:1956次

    免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)是利用抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)。


    包埋组织

    在4%多聚甲醛溶液中固定组织48小时后,放入一次性组织包埋盒中脱水,浸蜡后包埋。


    修片


    修剪石蜡切片,直至将石蜡切片修到大部分组织在切面上。

    组化


    3.1 蜡块制备

    将组织蜡块提前泡到冰水混合物中使其变软,将组织蜡块放在切片机上切出5微米的切片,60°C烘片1小时。


    3.2 脱蜡

    1)将切片放到60°C烘箱中烘片4h以上。

    2)在二甲苯I里置入片子,持续0.5 h,再置于二甲苯II,依然持续0.5 h。


    3.3 水化

    1)通过酒精,浸泡切片,酒精浓度不一,分为70%、80%、90%、95%、100%,各浓度浸泡时间也有所差异,前3个浓度都是各自浸泡2分钟,后面两个浓度分别浸泡5分钟、10分钟。

    2)最后将片子放到双蒸水中浸泡2min。


    3.4 组化

    1)封闭处理:选择内源性过氧化物酶阻断剂,处理时间为20 min。

    2)用双蒸水浸泡三次,单次时间5 min。

    3)抗原修复:准备pH=6.0的10 nM柠檬酸抗原修复液400-600 ml,把片子放到里面,用保鲜膜封住烧杯口防止沸腾溢出。之后放到微波炉中用高火加热10 min。

    4)加热后用双蒸水补齐液面,在微波炉中加热40 min(中低火至解冻之间),每隔10 min用双蒸水补齐液面。

    5)修复结束后,放到室温下,使其自然冷却。

    6)DDW清洗180"之后,通过PBS清洗,3分钟/次,进行三次。

    7)通过一抗封闭,保持4°C,第二天进行温度回升,为37°C,然后通过PBS清洗,持续5分钟。

    8)在其中添加反应增强液,然后孵育,室温条件,持续20 min,再通过PBS清洗,3分钟/次,进行三次。

    9)加入增强酶标山羊抗小鼠/兔IgG聚合物,然后孵育,室温条件,持续20 min,再通过PBS清洗,3分钟/次,进行三次。

    10)滴加DAB显色液(现用现配、比例1:19),室温孵育2-10 min(根据不同的抗体自行选择染色时间)。用自来水轻轻冲洗掉。

    11)复染:加苏木精染色50 s。用DDW,3 min,PBS,5min X3次。

    12)脱水:将片子依次浸泡到不同浓度的酒精梯度中:70%,lmin—80%,lmin—90%,1 min—95% I,5min—95% II ,5min—100%I,5min—100% II,5min。

    13)透明:利用二甲苯I、二甲苯 II 进行处理,每次处理持续20 min。

    14)中性树脂封片,中性树脂,加盖玻片(组织部位切勿残留小气泡),自然晾干。

    来源:科研日精进

    评论 / 文明上网理性发言
    12条评论
    全部评论 / 我的评论
    最热 /  最新
    全部 3小时前 四川
    文字是人类用符号记录表达信息以传之久远的方式和工具。现代文字大多是记录语言的工具。人类往往先有口头的语言后产生书面文字,很多小语种,有语言但没有文字。文字的不同体现了国家和民族的书面表达的方式和思维不同。文字使人类进入有历史记录的文明社会。
    点赞12
    回复
    全部
    查看更多评论
    相关文章

    【科研干货】电化学表征:循环伏安法详解(上)

    2019-10-25

    晶体结构可视化软件 VESTA使用教程(下篇)

    2021-01-22

    手把手教你用ChemDraw 画化学结构式:基础篇

    2021-06-19

    【科研干货】电化学表征:循环伏安法详解(下)

    2019-10-25

    基础理论丨一文了解XPS(概念、定性定量分析、分析方法、谱线结构)

    2020-05-03

    Zeta电位的基本理论、测试方法和应用

    2020-08-24

    热门文章/popular

    【科研干货】电化学表征:循环伏安法详解(上)

    晶体结构可视化软件 VESTA使用教程(下篇)

    手把手教你用ChemDraw 画化学结构式:基础篇

    电化学实验基础之电化学工作站篇 (二)三电极和两电极体系的搭建 和测试

    【科研干货】电化学表征:循环伏安法详解(下)

    基础理论丨一文了解XPS(概念、定性定量分析、分析方法、谱线结构)

    微信扫码分享文章

    意见反馈

    有奖举报

    商务合作

    ...

    更多

    公众号

    关注我们 了解更多

    小程序

    随时预约 掌握进度

    举报有奖

    TEL: 191-3608-6524

    如:在网络上恶意使用“测试狗”等相关关键词误导用户点击、恶意盗用测试狗商标、冒称官方工作人员等情形,请您向我们举报,经查实后,我们将给予您奖励。

    举报内容:

    200

    上传附件:
    文件格式不正确,请重新上传文件格式不正确,请重新上传文件格式不正确,请重新上传
    文件格式:jpg、jpeg、png、gif、tif、doc、docx、ppt、pptx、xls、xlsx、pdf、zip、rar
    联系方式
    姓名
    电话
    提交意见

    意见反馈

    Suggestions

    您可以在此留下您宝贵的意见,您的意见或问题反馈将会成为我们不断改进的动力。

    意见类型
    测试服务
    网站功能
    财务报账
    其他类型
    意见内容

    200

    联系方式
    姓名
    电话
    提交意见

    收起

    01

    专属信用额度,先测后付0元下单

    02

    下单享高额积分,万千好礼免费兑

    200
    200元无门槛优惠券
    立即激活 立即下单
    已使用
    已作废

    全流程在线可视化,便捷高效触手可及

    如下单过程中有任何疑问或需要帮助,请随时咨询专属顾问~
    9
    9折无门槛优惠券

    支付一笔订单后可领取

    立即领取 立即下单
    已使用
    已作废

    免费测+惊喜盲盒+高额福利,多重福利大放送

    新人免费测

    双双开盲盒(100%中奖)

    邀请人专享

    受邀人专享

    创建/加入团队,解锁定制化权益

    01

    1500元团队专属优惠券

    02

    万元大额信用额度,享先测后付

    03

    团队成员统一开票报销;

    04

    专业工程师课题专属服务

    领取成功,请下单
    请您支付一笔订单后才可以领取优惠券
    Document
    关于我们 新手帮助 测试干货 商务合作 基金查询 相关资质 模拟计算 现场测试 服务项目 科研绘图 同步辐射 电池行业

    联系方式/contact

    400-152-6858

    工作时间/work time

    09:00-18:00

    测试狗公众号

    关注我们 了解更多

    测试狗小程序

    随时预约 掌握进度

    蜀公网安备51010602000648号

    蜀ICP备17005822号-1

    成都世纪美扬科技有限公司

    Copyright@测试狗·科研服务