网站地图关于合作招聘帮助

热线：400-152-6858

测试狗科研服务

预存定制

登录

|

注册

Document

当前位置：文库百科 › 文章详情

实时荧光定量PCR（qPCR）的实验步骤解析

来源：时间：2022-12-29 09:33:40 浏览：3245次

qPCR: Quantitative Real-time PCR,中文名是实时荧光定量PCR。qPCR是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。

TakaRa 试剂盒PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)，SYBRGreenⅠ法。

实验步骤：

一，去除基因组DNA反应：

全波长酶标仪测出RNA浓度（单位ng/ul）;按照以下剂量配制10ul体系

试剂	使用量
5×gDNA Eraser Buffer	2 μl
Buffer 2.0 μl gDNA Eraser	1 ul
Total RNA	1ug/RNA浓度
RNase Free dH2O	Up to10 ul

PCR程序：42℃ 2min

4℃ ∞

二，反转录反应：

按照以下剂量配制20ul体系：

试剂	使用量
步骤 1 的反应液	10 ul
PrimeScript RT Enzyme Mix I	1 ul
RT Primer Mi	1 ul
5×PrimeScript Buffer 2（for Real Time）	4 ul
RNase Free dH2O	4 ul
Total	20 ul

PCR程序：37℃ 15min

85℃ 5s

4℃ ∞

三，Real Time PCR

按照以下剂量配制20ul体系：

试剂	使用量
SYBR@ Premix Ex TaqII(2X）	10 ul
F Primer(10uM)	0.8 ul
R Primer(10uM)	0.8 ul
ROX Reference II	0.4 ul
反应2的DNA模板	2 ul
ddH2O	6 ul

四，仪器设置

仪器使用的是荧光定量PCR仪Q6-96，设置界面如下图：

测试狗文库百科

上一篇：荧光定量PCR检测法的原理和应用领域

下一篇：振实密度分析仪的设备功能和工作原理

2021-01-22

【科研干货】电化学表征：循环伏安法详解（上）

2019-10-25

手把手教你用ChemDraw 画化学结构式：基础篇

2021-06-19

【科研干货】电化学表征：循环伏安法详解（下）

2019-10-25

晶体结构可视化软件 VESTA使用教程（上篇）

2021-01-22

TEM照片处理软件 Digital Micrograph的进阶操作

2020-11-02

项目推荐/Project

实时荧光定量PCR

举报有奖

TEL: 191-3608-6524

如：在网络上恶意使用“测试狗”等相关关键词误导用户点击、恶意盗用测试狗商标、冒称官方工作人员等情形，请您向我们举报，经查实后，我们将给予您奖励。

举报内容：

200

上传附件：

文件格式不正确，请重新上传文件格式不正确，请重新上传文件格式不正确，请重新上传

文件格式：jpg、jpeg、png、gif、tif、doc、docx、ppt、pptx、xls、xlsx、pdf、zip、rar

联系方式

姓名

电话

提交意见

意见反馈

Suggestions

您可以在此留下您宝贵的意见，您的意见或问题反馈将会成为我们不断改进的动力。

意见类型

测试服务

网站功能

财务报账

其他类型

意见内容

200

联系方式

姓名

电话

提交意见

收起

Document